原位杂交技术及其在病理诊断中应用

作者:发布时间:2010/4/16 11:12:52

1.定义

原位核酸分子杂交技术简称原位杂交(in situ hybridization  ISH)是应用特定标记的已知核酸探针与组织、细胞中待检测的核酸按碱基配对的原则进行特异性结合而形成杂交体,杂交信号可以在光学显微镜或电子显微镜下进行定位不破坏细胞结构,确定目的序列在胞内空间位置,这一点具有重要的生物学和病理学意义。

在组织切片、细胞涂片及染色体制片上对核酸(mRNADNA)进行定性、定位和相对定量研究的一种分子生物学方法。

用原位杂交术,可在原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的表达基因的存在与定位。

可进一步从分子水来探讨细胞的功能表达及其调节机制。

具有灵敏、特异、直观等优点。

2.原位杂交技术的原理

原位杂交的本质就是在一定的温度和离子浓度下,使具有特异序列的探针通过碱基互补规则与组织切片或细胞内待测核酸(RNADNA)片段复性结合而使得组织细胞中的特异性核酸得到定位,并通过探针上所标记的检测系统将其在核酸的原有位置上显示出来。

3.原位杂交技术的基本操作

①杂交前准备

②杂交

③杂交后处理

④显色  

4.原位杂交技术的应用

1. 乳腺癌 HER-2 的诊断

2. 人乳头状瘤病毒检测

3. 产 前 诊 断